Как проводится квантифероновый тест на туберкулез в инвитро и диаскинтест

Квантифероновый тест, диаскинтест, полимеразная цепная реакция (пцр) – реакции позволяющие с высокой степенью достоверности определить малые формы туберкулеза на ранних стадиях. Методы внедрены недавно, поэтому их клиническая апробация на практике продолжается.

Фтизиатры считают негативным моментом официальный отказ от туберкулинодиагностики и использование вышеперечисленных диагностических способов в качестве основного способа выявления заболевания на раннем этапе. Экономический эффект от использования процедур представляет большую важность для государства. Здоровье человека – вторично.

Нельзя игнорировать традиционные методы, которые более 50 лет приносили положительный эффект. С их помощью удалось уменьшить заболеваемость, предотвратить смертность.

Квантифероновый тест в инвитро (in vitro) разработан для замены туберкулинодиагностики. Альтернатива не проверена на практике. Лишь исследования утверждают о высокой чувствительности теста.

Суть квантиферонового теста – определение гамма-интерферона, который высвобождается Т-лимфоцитами при встрече с микобактериями туберкулеза. Инвитро (in vitro) определяются специфические белки, которые входят в состав микобактерии туберкулеза человеческого, бычьего типов (TB7.7, CFP-10, ESAT-6). На них вырабатывают специфические антитела. Выявление протеинов с помощью квантиферонового теста является достоверной диагностикой наличия палочки Коха в организме. С помощью анализа можно выявить также микобактериозы (M. Szulagai, M. Kansasii, M. marinum). При положительном результате теста нужно провести дифференциальную диагностику между возбудителями туберкулеза и микобактериозами.

Как проводится

Тест определяет содержание гамма-интерферона к вышеописанным протеинам. Результат определяется на основе оценки пробы из 2 пробирок.

После практического применения квантиферонового теста ученым удалось выяснить, что треть населения инфицирована микобактерией. Только у 6-10% развивает заболевание. Неблагоприятные факторы активизируют скрытую инфекцию при наличии слабого иммунитета.

Группа высокого риска по туберкулезу с положительным квантифероновым тестом:

• Контактирование с больным;
• Работники противотуберкулезных заведений;
• «Выпускники» исправительных заведений;
• Лица с ВИЧ-инфекцией;
• Больные сахарным диабетом.

Квантифероновое исследование назначается при невозможности проведения Диаскинтеста и пробы Манту:

1. Хронические, острые, соматические болезни при обострении;
2. Непереносимость туберкулина;
3. Аллергические, кожные заболевания при обострении;
4. Карантин в детских учреждениях, которые посещает ребенок.

Ложноположительная реакция на пробы Манту наблюдается у людей с индивидуальной непереносимостью туберкулина. Такие особенности туберкулиновой пробы стали основой для отказа от теста.

Сравнительные особенности тестов на туберкулез: Диаскинтест, Манту, квантифероновый тест:

Проба Манту и диаскинтест – кожные пробы, квантифероновое исследование осуществляется после взятия пробы крови;

• Побочных реакций не наблюдается при проведении квантиферонового теста;
• Есть противопоказания к диаскинтесту и туберкулинодиагностике;
• Высокая специфичность – квантифероновый, диаскинтест;
• Ложноположительные результаты наблюдаются при пробе Манту;

Нет зависимости от сроков проведения профилактической прививки у квантиферонового теста. Остальные исследования проводятся не раньше месяца после БЦЖ;

Объективная интерпретация результатов – только при квантифероновом тесте.

Отсюда достоинства квантиферонового теста:

1. Нет ложноположительных реакций;
2. Отсутствие ограничений, противопоказаний;
3. Нет побочных эффектов;
4. Безопасность;
5. Высокая специфичность, чувствительность (89%).

Показания к квантифероновому тесту:

• Контакты с туберкулезным больным;
• Высокий риск контактирования с возбудителем;
• Положительный тест Манту;
• Противопоказания к диаскинтесту, туберкулинодиагностике;
• Обследование мигрантов.

Квантифероновый тест не проводит градацию между активными и латентным туберкулезом. При положительном результате требуется консультация фтизиатра, определяющая дальнейшую тактику ведения пациента. Если определенный уровень гамма-интерферона не свидетельствует об инфицировании, вероятности активной инфекции, следует проводить динамическое наблюдение за пациентами.

Пример оценки результатов квантиферонового теста:

1. Содержание в пробирке с ТВ-антигеном гамма-интерферона менее 0,35 – слабый туберкулезный процесс или скрытое инфицирование;
2. Результат контрольной пробирки до 8;
3. Пробирка с митогеном – гамма-интерферон от 0,5;
4. Отрицательный.

Вышеописанные результаты определяют скрытое или латентное течение инфекции.

Отрицательная проба свидетельствует об отсутствии инфицирования М.tuberculosis. При положительном результате вероятность наличия возбудителя вероятна. При сомнительном тесте можно предположить чувствительность к ТВ-антигену.

О чем говорит положительный результат квантиферонового теста:

1. Инфицирование нетуберкулезными бактериями (M. Marinum, M. Szulgai, M. kansasii);
2. Наличие микобактерии туберкулеза в организме.

Оценка при сомнительном результате теста:

1. Плохая преаналитическая подготовка;
2. Индивидуальные иммунные особенности.

При получении вышеописанных результатов проводится забор нового образца крови.

О чем свидетельствует отрицательный результат квантиферонового теста:

1. Иммунодефицит;
2. Раннее инфицирование;
3. Несоблюдение требований преаналитики;
4. У детей до 5 лет.

Получение отрицательного результата не позволяет исключить инфицирование туберкулезом.

Оценка результатов проводится с учетом клинико-эпидемиологической картины и других анамнестических особенностей человека.

Новый тест на туберкулез – диаскинтест

Тест на туберкулез под названием «диаскинтест» становится заменой привычной туберкулинодиагностики. Суть метода заключается в подкожном введении подкожно некоторого количества белка, специфичного для микобактерии туберкулеза. Положительный результат характерен для пациентов с активной инфекцией, а также у больных со скрытым инфицированием. Отрицательные результаты не исключают инфицирования. Негативная проба может проявить наличие выраженного иммунитета против микобактерии туберкулеза.

По результатам клинических исследований диаскинтест является более чувствительным и универсальным методом диагностики по сравнению с пробой Манту.

Новый способ диагностики определяет тубинфицированность, лежит в основе выявления реакции организма на присутствие микобактерий. Анализ разработан в России. Академики НИИ Сеченова разработали исследование, которое на практике показало высокую эффективность.

Достоинства диаскинтеста:

• Раствор содержит видоспецифические белки (CFP10, ESAT6);
• Высокая чувствительность;
• Точный результат;
• Можно использовать для динамического наблюдения при лечении.

Разный состав Манту и диаскинтеста определяет различные клинические эффекты обоих методов. При введении туберкулина появляются ложноположительные реакции, обусловленные введением большого количества чужеродных антигенов.

Диаскинтест обуславливает положительную реакцию тогда, когда организм человека встречался с туберкулезными антигенами ранее. Реакция формирует высокую точность.

При положительной реакции Манту необходимо проводить профилактическое лечение. Его назначение не всегда рационально.

Как проводится диаскинтест

Инъекция вводится внутрикожно. Тонкой иглой в среднюю треть плеча ставится проба. При использовании обеих проб (вместе с Манту) можно заранее определить ложноположительные результаты.

Чтение результатов диаскинтеста рационально проводить через 72 часа, когда четко выражена местная реакция. Диагностическое значение имеет уплотнение, красное пятно, появляющееся после проведения пробы.

Отрицательный результат наблюдается при отсутствии уплотнения или красного участка на месте инъекции. Сомнительная проба – при наличии припухлости или небольшого красного пятна не более 4 мм.

При обнаружении покраснения более 5 мм – положительный диаскинтест.

Гиперергическая реакция прослеживается при присутствии в месте инъекции очага уплотнения и покраснения размером более 15 мм. Пузырьки, изъязвления, увеличение лимфоузлов дополняют положительный результат пробы.

Противопоказания к проведению диаскинтеста:

1. Обострение болезней внутренних органов: дерматит атопический, пиелонефрит, панкреатит, колит, гепатит;
2. Активное течение хронических и острых заболеваний с высокой температурой: бронхит, пневмония, пиелонефрит, ОРВИ;
3. Эпилепсия;
4. Обострение аллергических состояний.

Субстрат для диаскинтеста получается на основе кишечной палочки. Препараты хорошо переносятся человеком, провоцируют недомогание, головную боль.

Промежуток между диаскинтестом и профилактической прививкой не должен быть меньше 1-го месяца.

Дст тест – что это такое

Дст тест – это упрощенное название диаскинтеста. Проба достаточно информативна, но недостаточно чувствительна. Рационально применять исследование при сочетании с пробой Манту, что позволяет получить необходимые врачу результаты.

С помощью дст удается выделить из общей популяции количество людей, зараженных человеческим видом возбудителя.

На практике проба показала иные результаты, чем планировали разработчики. ДСТ должен быть положительным при наличии M.tuberculosis bovis и M.tuberculosis humanis, но положительные реакции на присутствие вышеперечисленных возбудителей во внелегочных очагах исследование дает не всегда. Ситуация объясняется изменчивостью микобактерий.

Нельзя использовать дст при присутствии микобактерий в лимфоузлах у детей, чтобы не спровоцировать активацию туберкулезного процесса. Состояние диагностируется пробой Манту, от которой Минздрав решил отказаться.

Оценка результатов гиперергической реакции не позволяет разграничить латентное и острое течение болезни.

Результаты дст по-разному ведут себя у следующих категорий больных:

1. Классическая легочная форма;
2. Внелегочной туберкулез;
3. Аллергический туберкулезный процесс.

При 3 формах положительная туберкулиновая реакция. ДСТ положительной у первой категории. Во второй – чаще отрицательный. У третьей категории результаты не проверены практикой.

На основании вышеприведенных фактов можно утверждать, что диаскинтест поможет врачу диагностировать легочные формы с высокой степенью достоверности.

Результат туберкулезной диагностики – как оценивать

Оценивать результаты туберкулиновой диагностики сложно. Согласно некоторым практическим исследованиям отмечается отрицательный дст при вираже туберкулиновой пробы в 50% случаев. Факты свидетельствуют о том, что в половине случаев заражение легких вероятно обусловлено бычьим типом.

Высока заболеваемость микобактерией среди людей разводящих скот. Вопросов много. Оценивать результаты тестов требуется после постановки нескольких тестов.

Нужно четко разграничивать инфицированность и заболеваемость. Понятие несколько отличны по сути.

Существует несколько интересных вопросов, на которые специалисты не могут получить ответы:

• Какая часть инфицированности населения бычьим видом;
• Почему возникает скачок заболевания при посещении ребенком детского сада;
• Как заражается человек при попадании в среду с отсутствием микобактерий;
• Какая палочка Коха дает тяжелое течение;
• Длительность сохранения аллергии на туберкулез.

Исследования на животных подтвердили трансформацию штамма БЦЖ в L-формы микобактерий туберкулеза. Такая форма никогда не уничтожается организмом, что обеспечивает поддержание иммунитета. Прививка обеспечивает реинфекцию, что требует подробного изучения. Отмена пробы Манту возможно является правильным решением. Время покажет.